热门搜索:  包装盒  印刷  水果包装盒  水果包装盒  as  88888
全部商品分类
主页 > 新闻中心 > 行业动态 >

病毒的包装是什么意思它的原理及经验

发布日期:2020-06-24 15:37

病毒的包装是什么意思它的原理及经验

病毒的包装

慢病毒(Lentivirus)的包装是一种逆转录病毒,它可以将靶基因引入一些难以转染的细胞中,例如原代细胞等。 靶基因随机整合到宿主基因组中,大大提高了转染效率,可以在细胞系中稳定表达数代,可以筛选出稳定的转染细胞系。 由于随机积分,还存在不确定因素。 一些公司还可以提供靶向整合技术,将靶向基因整合到基因组的特定部分,以确保其病毒的包装表达且不会因随机整合而对细胞造成伤害。  

慢病毒表达载体包含包装,转染和稳定整合所需的遗传信息。 慢病毒包装质粒可以提供转录和包装RNA到重组假病毒载体中所需的所有辅助蛋白。 为了产生高滴度的病毒颗粒,有必要用表达载体和包装质粒将细胞共转染,将病毒包装在细胞中,将包装的假病毒颗粒分泌到细胞外培养基中,将上清液通过离心获得,然后可以直接用于宿主细胞感染。  

慢病毒载体基因组是一种正链RNA。 基因组进入细胞后,通过自身的逆转录酶逆转录成细胞质中的DNA,形成DNA整合前复合体。 进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。 整合的DNA转录mRNA,并将其返回细胞质,表达目的蛋白或产生RNAi干扰。 慢病毒的包装系统由包装质粒混合物(Mix)和慢病毒载体质粒组成。  

通过胰蛋白酶消化收集细胞,将细胞在35mm培养皿中用适当的完全培养基压平(根据实验需要选择培养皿,使细胞占据的面积附着在80%的培养皿上)。 培养皿的总面积%以上)。 将细胞在含有5%CO2的37°C培养箱中孵育8-24小时。 当细胞完全粘附于细胞后,即可开始转染。 转染前2h病毒的包装更换培养基(将旧培养基替换为1.5ml完全培养基)。  

在我们的实验室中,我们包装了VSV-GPF病毒。 首先,将BHK21细胞分散在6孔板中。 达到90%的丰度后,将它们感染痘病毒,提供T7RNA聚合酶,然后用prVSV-GFP主链质粒转染。 表达4种结构蛋白的pBS-NpBS-P,pBS-G,pBS-L辅助质粒。  48小时后,收集上清液,再次感染健康细胞后可见GFP表达。 请诸神,辅助质粒的目的是什么? 由于prVSV-GFP骨架质粒带有N,P,G和L的四个结构基因,因此尚不为人所知,但是如果没有辅助质粒则无法包装病毒。

有遗传物质有外壳蛋白,可以引导两者进入病毒。 腺病毒只能在293A中扩增,而不能在其他细胞中扩增。 慢病毒载体大多被HIV修饰,可以复制野生型慢病毒的包装载体,但只能在实验室中使用。 使其具有复制缺陷。 简而言之,它是替换或删除与相应功能有关的相应元素。  

病毒在细胞中进行基因组复制和蛋白质表达,然后自行组装。 微观世界中的病毒颗粒很奇怪,并且具有不同的结构。 每种类型的病毒都有其自己的特殊组装方法。 然而,受科学技术水平的限制,病毒装配领域的研究工作相对不受欢迎。 如果要实时动态观察病毒组装,仍然很难实现。 因此,许多有关病毒的包装研究仍几乎是空白。 即使有研究,或者可以确定整个病毒组装过程,我个人认为可能只有5分之5。  

分段病毒的包装,例如流感病毒,布尼亚病毒和虎肠病毒。 这些病毒的基因组是分段的。 如何确保在病毒包装过程中可以将每个基因组包装到病毒颗粒中。 以具有三段基因组的布尼亚病毒为例,如果只包装基因组的两个片段,会形成病毒颗粒吗? 但是可以肯定的是,即使可以形成颗粒,病毒仍具有复制缺陷。  

另一个有趣的现象是“空心包装”(我自己的名字)现象。 两天前,我读了一篇有关塞内卡病毒结构生物学的论文。 塞内卡病毒的包装属于小RNA病毒家族,很像口蹄疫病毒。 该论文的作者提到,他们发现细胞中10%的病毒不包含基因组,即所谓的病毒样颗粒(VLP),或者当包装病毒时,基因组没有被封闭,它们被 直接形成的。 完整的蛋白质外壳。 作者在文章中说,这个“空心包装”现在大象的机制尚不清楚。 让我用一个易于理解的词来概括它:尽管该病毒的包装看起来很严密有序,但有时还是会漏掉。  

 

 

  • 印刷官方微信
  • 扫描二维码,即刻与全仓亲密互动,第一时间获取最新优惠!
  • 客服热线:
    13641285771